서던 블로팅

DNA그리기 열라 귀찮았나보다
젤 전기영동과 핵산 혼성화를 조합한 방식으로 아가로오스평판으로 전기이동한 DNA 단편을 니트로셀룰로오스막에 옮긴 후 그 막에 방사선 표지를 한 DNA 또는 RNA를 혼성화시켜 목적하는 DNA를 검출하는 방법을 말한다. 1975년에 에드윈 서던(E.M Southern)이 개발한 방법이라고 하여 '서던 블로팅'이라고 한다.

대략적인 순서를 요약하면 다음과 같다.

1. DNA 시료를 제한 효소로 여러개의 절편으로 조각조각 절단한다.
2. 잘게 절단된 DNA절편들을 홈이 파여진 아가로스 겔(Agarose gel)의 홈에 넣고 전류를 흘려주면 DNA가 (-)를 띄고 있기 때문에 전기적으로 끌려 이동하게 된다. 이때 무거운 DNA절편은 느리게 이동하고 가벼운 DNA절편은 빠르게 이동하기 때문에 DNA가 사이즈 별로 나열된다.
3. 겔 내부에 있는 이중 나선을 단일 나선으로 변성시킨다.
4. 이 나열된 형태를 여과지로 Ctrl CV 그대로 전이시킨다.
5. 탐지하고자 하는 DNA와 상보적인 DNA 탐침(probe)을 제조한다. 탐침은 검출을 위해 방사성 동위원소로 표지되어있다.
6. 여과지와 탐침을 플라스틱 봉지에 넣어 충분한 시간동안 혼성화를 진행시킨다. 관심있는 DNA절편과 탐침이 다시 이중나선을 형성한다.
7. 마지막으로 X선 필름에 여과지를 감광시켜 특정 DNA의 존재를 확인한다.

여기에서도 과학자들의 네이밍 센스를 알 수 있는데(오래살아라든가, 주당, 소닉 헤지호그 단백질, 개구린, 피카츄린같은) 서던 블로팅은 DNA를 검출할 때 사용하는 방법인데 이것과 같은 원리로 RNA를 검출해내는 방법을 노던 블로팅(Northern blotting)이라고 한다. 또한 비슷한 원리로 단백질을 검출하는 방법은 웨스턴 블로팅(Western blotting)이라고 한다. 그리고 이스턴 블로팅(Eastern blotting)은 단백질의 번역 후 수정과정을 찾기 위한 방법이라고 한다. (물론 노던, 웨스턴, 이스턴이 개발한 방법이 아니다).동서남북 완성 아무리 서던에 '남쪽의' 라는 뜻이 담겨있다지만 사람 이름인데... 이제 업워드 블로팅(Upward blotting)과 다운워드 블로팅(Downward blotting)만 나오면 3차원 완성